组织培养实例

　　1.桑芽分离培养及其试管苗的快速繁殖

　　从桑树植株上分离的冬芽、腋芽、顶芽在含有细胞分裂素和生长素的MS或改良MS培养基上，给予人工光照和25土1C的恒温控制，可获得完整的试管植株。这一培养体系已基本建立。经反复试验表明，生长培养基采用MS,LS,附加6-苄基氨基嘌呤每升0. 1?1毫克，萘乙酸或吲哚丁酸0. 1?0. 5毫克、蔗糖2%?3%，培养第四天，桑芽萌发，第十天开1?2叶，30天后开3?4叶;增殖培养基采用MS每升附加6-苄基氨基嗓呤1?2毫克，吲哚乙酸或萘乙酸0. 2?0. 5毫克，经过30?40天，每芽能分化无根苗6~12株;生根培养基采用1/2MS，每升附加吲哚丁酸0.25?0. 5毫克，蔗糖1%或无任何激素的MS培养基上，经过20天左右，产生大量不定根，30天后长出一级侧根。

　　从生长物质对桑芽茎叶开展和器官形成的影响来看，得到以下试验结果：

　　第一，无论冬芽、顶芽、腋芽，在离体培养过程中，细胞分裂素6-苄基氨基嘌呤是必不可少的。

　　第二，在冬芽分离培养过程中，发现仅用细胞分裂素6-苄基氨基嗓呤，不加其他生长素，能正常开叶，并形成新梢，而腋芽、顶芽的培养，在添加6-苄基氨基嘌呤的同时，还需添加生长素。

　　第三，根据不同的目的与要求，使用生长物质的种类和浓度，在不同培养阶段，作些适当调节是完全必要的。

　　第四，由于桑树品种的不同，生长物质的使用效果有明显差异，这种差异可能与基因型有关。

　　第五，蔗糖和琼脂粉的使用量，对冬芽生长也有一定的影响。试验结果以每升培养基添加20?30克的蔗糖为最佳。琼脂粉以3. 5?4克为宜，有展开叶片数多、鲜重增加的倾向。

　　2. 桑未成熟胚(幼胚)的离体培养，形成不定芽

　　通过培养条件的控制和各种激素的调节，桑未成熟胚在添有水解酪蛋白的MS培养基上，诱导形成愈伤组织，再由愈伤组织分化形成不定芽。诱导愈伤组织培养基为MS，每升附加6-苄基氨基嘌呤0. 5毫克，萘乙酸或2,4-D 2毫克，水解酪蛋白500毫克;分化培养基为MS，附加6-苄基氨基嗓呤2毫克,萘乙酸0.1毫克。

　　3. 桑花药培养

　　据有关报道，桑花粉发育到单核中期，以MS为基本培养基，每升添加吲哚丁酸2毫克，6-苄基氨基嘌呤1?2毫克，诱导出胚状体;分化培养基为MS，每升添加吲哚丁酸0.1?0. 5毫克，6-苄基氨基嘌呤1?2毫克;生根培养基为MS,添加吲哚丁酸0.5?2毫克，培养2?4天后转入无激素的MS培养基。

　　4.愈伤组织的培养和器官再分化

　　用种子萌生的下胚轴和黄化子叶片培养，经过愈伤组织分化出不定芽。诱导愈伤形成的培养基为MS或改良MS,每升附加6-苄基氨基嘌呤0. 5毫克，萘乙酸1毫克，2,4-D1毫克，水解乳蛋白500毫克。分化培养基为改良MS，每升附加6-苄基氨基嘌呤2?4毫克、吲哚乙酸0. 01?0. 1毫克。

　　5.叶片培养形成不定芽

　　在适宜的营养条件下，以新一之濑品种的幼嫩叶片为材料，经过30天的培养，叶片表面形成了不定芽。此培养基为MS或改良MS,每升附加6-苄基氨基嘌呤1. 5?2. 5毫克，吲哚乙酸0.1?0. 25毫克，葡萄糖3%,水解乳蛋白500毫升。